活性定義：
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內，將10 nmol脫氧 核苷酸摻入到酸性不溶物質所需的酶量定義為1個活性單位（U）。
質量控制：
經過多次柱純化，SDS-PAGE檢測其純度大于99%；經檢測無外源核酸酶活性； PCR方法檢測無宿主殘余DNA；能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一個月，無明顯活性改變。
使用方法：
以下舉例為常規PCR反應體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的改進和優化。
1. PCR反應體系：
| 試 劑 | 50 μl體系 | 終濃度 |
| 10×Pfu PCR Buffer | 5 μl | 1× |
| dNTP Mix，10 mM each | 1 μl | 200 μM each |
| Forward Primer（10 μM） | 1-2 μl | 0.2-0.4 μM |
| Reverse Primer（10 μM） | 1-2 μl | 0.2-0.4 μM |
| Template DNA | <1 μg | <1 μg/reaction |
| Pfu DNA Polymerase, 2.5 U/ μl | 1 μl | |
| RNase-Free Water | up to 50 μl |
注意：
1）用Pfu酶擴增時，引物的純度要求較高，引物長度大于18個堿基，引物濃度請以終濃度 0.2-0.4 μM作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。
2）鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為設定范圍的參考。本產品的10×Pfu PCR Buffer中已經含有20 mM鎂離子，可根據不同的引物對和模板來調節鎂離子濃度，由此優化反應體系。
2. PCR反應條件
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 預變性 | 94℃ | 2min |
|
變性 退火 延伸 |
94℃ 55℃-65℃ 72℃ |
30S 30S 60S * |
| 終延伸 | 72℃ | 5min |
* 延伸時間可以根據產物大小調整，Pfu DNA Polymerase擴增速度為1kb/min
注意：
1）Pfu酶的熱穩定性比Taq酶好，對于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃，對Pfu酶的活性無影響。
2）一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低2℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優化反應條件。
3）Pfu酶具有3′-5′外切酶活性，所以Pfu酶擴增時延伸速度遠比Taq酶低，延伸時間根據所擴增片段大小設定，本產品的擴增延伸速率為1 kb/1 min,根據目的片段大小可以適當更改延伸時間。
4）可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以在保證產物得率的前提下應盡量減少循環次數。
5）本產品具有3′-5′外切核酸酶活性，PCR產物3’端不帶“A”,不能直接用于T/A克隆，如需進行T/A克隆則需要在其末端添加“A”或用平末端載體進行克隆。
3. 結果檢測：反應結束后取5 µl反應產物，加入適量上樣緩沖液后，進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
