產品包裝：包含11種E2
使用次數：10T
保存溫度：-80℃
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E2Select Ubiquitin Conjugation Kit
| 產品編號 | 規格 | 價格 | 貨期 | |
| UBK-982 | Kit | ￥3280 | 現貨 |
- 產品描述
- 技術特性
- 訂貨信息
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此試劑盒可供體外泛素化檢測，篩選E3和底物所對應的E2酶，此試劑盒包含11種常用E2.也包含陽性對照S5a和ITCH
1.試劑盒組成：（10T）
| 名稱 | 體積 |
| 10 × Reaction Buffer | 200 μL |
| 10 × E1 Enzyme (His-tag) | 200 μL |
| 5 × Ubiquitin （凍干粉中加400μL水） | 400 μL |
| 10 × Mg2+-ATP | 200 μL |
| 10 × E3 Ligase Itch (Positive control) | 20 μL |
| 20 × S5a substrate (Positive control) | 20 μL |
| 10 × E2 Enzyme Set | |
| 20 × UBE2R1/UbcH3/Cdc34 (2R1) | 15 μL |
| 20 × UBE2N/UBE2V2 Complex (2N/2V2) | 15 μL |
| 20 ×UBE2D1/UbcH5a (D1) | 15 μL |
| 20 × UBE2D2/UbcH5b (D2) | 15 μL |
| 20 ×UBE2D3/UbcH5c (D3) | 15 μL |
| 20 × UBE2L3/UbcH7 (2L3) | 15 μL |
| 20 ×UBE2K/E2-25K (2K) | 15 μL |
| 20 ×UBE2C/UbcH10 (2C) | 15 μL |
| 20 ×UBE2E1/UbcH6 (E1) | 15 μL |
| 20 ×UBE2H/UbcH2 (2H) | 15 μL |
| 20 ×UBE2L6/UbcH8 (2L6) | 15 μL |
* -80℃保存，避免反復凍融
2.反應體系配制（20 μL）
| 名稱 | 體積 |
| 10 × Reaction Buffer | 2 μL |
| 10 × E1 Enzyme | 2 μL |
| 5 × Ubiquitin | 4 μL |
| 10 × Mg2+-ATP | 2 μL |
| 20 × E2 Enzyme | 1 μL |
| E3 Ubiquitin Ligase* | 0.2-2 μM |
| Substrate (可選)* | 1-5 μM |
| H2O | Up to 20 μL |
*使用者自己準備，E3 Ubiquitin Ligase可重組表達或從細胞裂解液中純化，Substrate (可選) not required for analyzing E3 Auto-Ubiquitination.
3. Positive control反應體系配制（20 μL）
| 10 × Reaction Buffer | 2 μL |
| 10 × E1 Enzyme | 2 μL |
| 5 × Ubiquitin | 4 μL |
| 10 × Mg2+-ATP | 2 μL |
| 20 × E2 Enzyme | 1 μL |
| 10 × E3 Ligase Itch (Positive control) | 2 μL |
| 20 × S5a substrate (Positive control) | 1 μL |
| H2O | 6 μL |
4.反應條件
37℃撫育 （30min-2h，如果效果不明顯可增加反應時間12h），建議使用PCR儀或金屬浴
5.結果檢測
（1）取樣品20 μL加入5 μL的5X SDS-PAGE Buffer（加入1 μL新鮮配制的1M DTT），加熱樣品95℃ 5 min，隨后使用還原性（含DTT）上樣緩沖液進行SDS-PAGE電泳分析;
（2）選擇E3 Ubiquitin Ligase、泛素、Substrate抗體進行Western-blot分析。
*以上結果為試劑盒陽性對照結果，紅色區域為底物蛋白S5a+nUB，發生了體外泛素化作用。
